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熒光染料簡(jiǎn)介

更新時(shí)間：2022-03-14 點(diǎn)擊次數(shù)：3131

概述

熒光顯微鏡的基本原理是借助熒光染料對(duì)細(xì)胞成分進(jìn)行高度特異性的可視化觀察。這可能是一種與興趣蛋白質(zhì)遺傳相關(guān)的熒光蛋白，如綠色熒光蛋白（GFP）等。如果克隆無法實(shí)現(xiàn)，例如在組織學(xué)樣本上無法實(shí)現(xiàn)，則需要使用另一種技術(shù)如免疫熒光染色來對(duì)興趣蛋白質(zhì)進(jìn)行可視化觀察。為此，人們使用抗體來連接不同的熒光染料并將其直接或間接地結(jié)合到適當(dāng)?shù)陌悬c(diǎn)上。此外，借助熒光染料，熒光顯微鏡的應(yīng)用就不再僅局限于蛋白質(zhì)觀察，還能對(duì)核酸、多糖和其他結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色，甚至像鈣離子這樣的非生物物質(zhì)也能被檢出。本文就為大家介紹了幾種常用的熒光染料。

免疫熒光
在熒光顯微鏡下，有兩種方法可以顯示興趣蛋白質(zhì)。可以借助內(nèi)在的熒光信號(hào)，也就是通過克隆從而在基因?qū)用姘岩粋€(gè)熒光蛋白和一個(gè)靶蛋白聯(lián)系起來；又或者借助熒光標(biāo)記的抗體特異性結(jié)合到興趣蛋白質(zhì)上。對(duì)于某些生物學(xué)問題來說，后者更為實(shí)用甚至更為必要。例如，在組織學(xué)樣本的情況下，通常樣本來自不含任何熒光蛋白的生物體，所以不可能使用熒光蛋白。此外，如果有功能性抗體可用，免疫熒光比熒光蛋白技術(shù)要快得多，因?yàn)闊晒獾鞍追椒ū仨毧寺∨d趣基因并將DNA轉(zhuǎn)染到相應(yīng)細(xì)胞中。熒光蛋白的另一個(gè)缺點(diǎn)在于其本身就是一種蛋白質(zhì)。因此細(xì)胞內(nèi)就具備了特定的蛋白質(zhì)特性，因而可能導(dǎo)致功能紊亂或?qū)λY(jié)合的興趣蛋白產(chǎn)生干擾。當(dāng)然，值得注意的是，熒光蛋白通常是觀察活細(xì)胞的方法。

免疫熒光利用抗體對(duì)抗原的特異性結(jié)合親和力。此處可存在兩種不同的結(jié)構(gòu)。簡(jiǎn)單的方法是使用一種熒光標(biāo)記的抗體，該抗體與興趣蛋白結(jié)合，稱為直接免疫熒光。

大多數(shù)情況下會(huì)使用兩種形式的抗體。第1抗體與靶蛋白結(jié)合，自身（1st抗體）沒有熒光標(biāo)記。但與第1抗體結(jié)合的第2抗體（2nd抗體）特異性攜帶熒光染料，這種方法被稱為間接免疫熒光。間接免疫熒光有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)，一方面會(huì)存在放大效應(yīng)，因?yàn)椴恢褂幸环N第2抗體與一種第1抗體結(jié)合。另一方面，針對(duì)您興趣蛋白，不需要一直用熒光染料標(biāo)記每種抗體，可以使用市售熒光標(biāo)記的第2抗體。免疫熒光中廣泛使用的熒光染料是FITC、TRITC或以下提到的幾種Alexa Fluor®染料。

FITC和TRITC
異硫氰酸熒光素（FITC）是一種有機(jī)熒光染料，目前仍用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)當(dāng)中。該染料在495/517nm處存在激發(fā)/發(fā)射峰，而且可借助其反應(yīng)性異硫氰酸酯基團(tuán)與蛋白質(zhì)上的氨基、巰基、咪唑基、酪氨酰或羰基結(jié)合而與不同的抗體偶聯(lián)。它的基本結(jié)構(gòu)，即熒光黃的分子量為332g/mol，常用作熒光示蹤劑。FITC（389g/mol）是最早用于熒光顯微術(shù)的染料之一，也是Alexa-fluor488等熒光染料的來源。它的熒光活性源于其自身的大共軛芳香電子結(jié)構(gòu)，在藍(lán)色光譜中會(huì)被光所激發(fā)。

圖 1：果蠅胚胎發(fā)育，綠色： FITC，紅色： TRITC。
經(jīng)常與FITC配合使用的一種染料是同出一門的TRITC（四甲基羅丹明-5-（和6）-異硫氰酸酯）。與FITC不同，TRITC不是熒光素，而是羅丹明系列衍生物。羅丹明也存在一個(gè)大的共軛芳香電子結(jié)構(gòu)，因此可以發(fā)出熒光。與FITC不一樣，TRITC（479g/mol）在綠色光譜中被激發(fā)，最大值出現(xiàn)在550nm處，最大發(fā)射波長(zhǎng)為573nm。與蛋白質(zhì)（如抗體）的結(jié)合也基于反應(yīng)性異硫氰酸酯基團(tuán)。

即使FITC和TRITC仍在使用，但考慮到兩者屬于相當(dāng)弱的熒光染料，不建議用于先進(jìn)的顯微術(shù)。兩者的優(yōu)勢(shì)主要還是在于成本低。

花青素
這種相對(duì)較小的熒光染料集合源于花青素并因此而得名：Cy2、Cy3、Cy5和Cy7。這些染料都可以通過反應(yīng)基團(tuán)與核酸或蛋白質(zhì)相連。例如，蛋白質(zhì)標(biāo)記使用馬來酰胺基團(tuán)。有趣的是，熒光方面Cy5對(duì)周圍的電子環(huán)境很敏感，這可用于酶的測(cè)定。黏附蛋白的構(gòu)象變化導(dǎo)致熒光發(fā)射的正負(fù)變化。此外，Cy3和Cy5可用于FRET實(shí)驗(yàn)。花青素染料是比較古老的熒光染料，也是其它熒光染料的基礎(chǔ)，具有亮度高、光穩(wěn)定性好、量子效率高等優(yōu)點(diǎn)。

圖 2：小鼠轉(zhuǎn)基因胚胎、肢間體節(jié)、E10.5小鼠轉(zhuǎn)基因胚胎的5個(gè)肢間體節(jié)： EpaxialMyf5 eGFP；GFP-Alexa 488免疫組化染色；用Desmin-Cy3對(duì)胚胎肌肉纖維進(jìn)行染色，用Hoechst揭示細(xì)胞核，自上而下尺寸： 3.5毫米 (a)、800微米 (b)。樣本提供： Aurélie Jory，法國(guó)巴黎巴斯德研究院干細(xì)胞與發(fā)育以及遺傳與分子細(xì)胞生物學(xué)研究所 (IGBMC) 成像中心

圖 3：小鼠成纖維細(xì)胞，綠色： F-Actin、FITC，紅色： Tubulin、Cy5，藍(lán)色：細(xì)胞核，DAPI。樣本提供：德國(guó)海德堡馬克斯-普朗克醫(yī)學(xué)研究所 Günter Giese 博士
DNA染色處理
在熒光顯微術(shù)中，不僅蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)感興趣，而且對(duì)核酸也感興趣。有時(shí)有必要通過檢測(cè)細(xì)胞核來確定細(xì)胞的確切位置或數(shù)量。最常見的DNA染色劑之一是DAPI（4',6-二氨基-2-苯基吲哚），主要與DNA雙螺旋富含A-T的區(qū)域結(jié)合。與未結(jié)合態(tài)相比，DAPI在DNA上的熒光強(qiáng)度增加。染料被UV（紫外線）光激發(fā)，最大激發(fā)波長(zhǎng)為358nm。發(fā)射光譜較寬，峰值在461nm。弱熒光也可以檢測(cè)到RNA結(jié)合。在這種情況下，發(fā)射轉(zhuǎn)移到500nm。有趣的是，DAPI能夠滲透完整的細(xì)胞膜。因此，該染料既可用于固定細(xì)胞也可用于活細(xì)胞。

第二種廣泛使用的DNA染色方法是Hoechst染料，最初由化學(xué)公司Hoechst AG生產(chǎn)。Hoechst 33258、Hoechst 33342和Hoechst 34580都是鄰苯二甲酰亞胺，具有向A-T富集區(qū)插入的趨勢(shì)，因此后者不常使用。與DAPI相似，此類染料受到紫外線激發(fā)并在455 nm下發(fā)射最大值，在無結(jié)合狀態(tài)下變?yōu)?10–540 nm。Hoechst染料還具有細(xì)胞滲透作用，因此可用于固定細(xì)胞和活細(xì)胞。與DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。

DNA染色劑碘化丙啶無法透過細(xì)胞膜。在細(xì)胞培養(yǎng)中，因?yàn)樵撊旧珓o法進(jìn)入完好的細(xì)胞內(nèi)，所以常常被用來區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。碘化丙啶也是一種結(jié)合劑，但對(duì)不同的堿基沒有特異性。在核酸結(jié)合態(tài)下，其最大激發(fā)波長(zhǎng)為538nm，最高發(fā)射波長(zhǎng)為617nm。未結(jié)合狀態(tài)下碘化丙啶的最大激發(fā)和發(fā)射被移到較短的波長(zhǎng)和較弱的強(qiáng)度。它也可以在不改變其熒光特性的情況下與RNA結(jié)合。要區(qū)分DNA和RNA，必須使用足夠的聚合酶。

吖啶橙是一種染料，可以在DNA和RNA之間形成差異區(qū)分而無需事先操作。其最大激發(fā)/發(fā)射對(duì)在DNA結(jié)合態(tài)為502nm/525nm，在RNA結(jié)合態(tài)為460nm/650nm。此外，該染料還可以進(jìn)入酸性間室中，如溶酶體。陽離子染料在酸性間室中質(zhì)子化。在酸性環(huán)境中，吖啶橙受藍(lán)色光譜中的光激發(fā)，而橙色區(qū)域的發(fā)射*。因?yàn)榈蛲黾?xì)胞有很多被吞噬的酸性間室，因此也讓該染料成為了這類細(xì)胞常用的標(biāo)記物。

間室與細(xì)胞器特異性染料
在熒光顯微鏡下，對(duì)細(xì)胞間室如溶酶體或核內(nèi)體和細(xì)胞器如線粒體等進(jìn)行染色通常較為合理。為此，本節(jié)將介紹一組特定染料組合。

觀察線粒體時(shí)一種*的方法是使用MitoTracker®。這是一種細(xì)胞滲透性染料，具有溫和的巰基活性氯甲基部分。該染料可以通過與半胱氨酸殘基的自由巰基反應(yīng)，與基質(zhì)蛋白共價(jià)結(jié)合。MitoTracker®有不同的顏色和改良成分（見表1），也是Molecular Probes的商標(biāo)。與傳統(tǒng)的線粒體特異性染色劑如羅丹明123或四甲基玫瑰胺不同的是，在用固定劑破壞膜電位后MitoTracker®不會(huì)被洗掉。

根據(jù)線粒體染色情況，還有染料標(biāo)記酸性間室如溶酶體等，稱為L(zhǎng)ysoTracker。這些是與熒光團(tuán)相連的膜滲透性弱堿。由于質(zhì)子化作用，這些堿很有可能與酸性間室有親和力。LysoTracker也有不同的顏色（見表1）。

與溶酶體類似的間室為真菌液泡，如釀酒酵母。這種薄膜包圍的空間也具有酸性。在熒光顯微鏡下觀察它的方法之一是使用苯乙烯基染料，如FM 4-64®或FM 5-95®。

在蛋白質(zhì)分泌實(shí)驗(yàn)方面，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）尤為值得注意。對(duì)這種間室進(jìn)行染色的一種經(jīng)典染料是DiOC6(3)。這種染料雖然偏向與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)合，但也能與線粒體膜等其他膜結(jié)合。另一種特定染色ER的方法是使用ER-Tracker，如綠色和紅色ER-Tracker。這兩種染料都是以BODIPY為基礎(chǔ)的染料，與格列本脲（一種磺酰脲酶）有關(guān)，能與ER膜上*的ATP敏感鉀通道結(jié)合。BODIPY（硼二吡咯甲基）描述了一組相對(duì)pH不敏感的染料，這些染料幾乎都不溶于水。這類染料并不是很好的蛋白質(zhì)標(biāo)記工具，但用于脂質(zhì)和膜標(biāo)記時(shí)效果較佳。

ER相近間室 – 高爾基體 – 可用熒光神經(jīng)酰胺類似物如 NBD C6-神經(jīng)酰胺和BODIPY FL C5-神經(jīng)酰胺進(jìn)行標(biāo)示。神經(jīng)酰胺是高爾基體中所富含的鞘脂。

在進(jìn)一步脂質(zhì)基染料的幫助下還有可能對(duì)特殊的膜區(qū)域，如脂質(zhì)筏等進(jìn)行染色。這些富含膽固醇的結(jié)構(gòu)域可以通過使用NBD-6膽固醇或NBP-12膽固醇等（Avanti極性脂質(zhì)）來進(jìn)行可視化觀察。

除了使用特殊的非蛋白熒光染料來標(biāo)記細(xì)胞間室外，還可以借助于對(duì)細(xì)胞中不同位置有偏好的蛋白質(zhì)來染色興趣區(qū)域。這些蛋白質(zhì)可以連接到熒光染料上，并在熒光顯微鏡下顯示出來。這種方法的一個(gè)例子是小麥胚芽凝集素（WGA）的使用，它與存在于質(zhì)膜中的唾液酸和N-乙酰氨基葡萄糖基特異結(jié)合。WGA與熒光染料偶聯(lián)。用它可以觀察到質(zhì)膜。

圖 4： Pukinje細(xì)胞，三色標(biāo)記的小鼠小腦皮質(zhì)矢狀切片。紅色：anti-calbindin-D28k/Cy3，綠色：anti-GFAP/Cy5，藍(lán)色： Hoechst 33258

圖 5：牛肺內(nèi)皮細(xì)胞。紅色： MitoTracker® Red CMXRos 標(biāo)記的線粒體，綠色：綠色熒光BODIPY® FL phallacidin標(biāo)記的纖維狀肌動(dòng)蛋白，藍(lán)色： DAPI 標(biāo)記的細(xì)胞核。此圖像采用3D盲反卷積方法提高了圖像質(zhì)量
ER相近間室 – 高爾基體 – 可用熒光神經(jīng)酰胺類似物如NBD C6-神經(jīng)酰胺和BODIPY FL C5-神經(jīng)酰胺進(jìn)行標(biāo)記。神經(jīng)酰胺是高爾基體中所富含的鞘脂。

在其他脂質(zhì)基染料的幫助下還可以對(duì)特殊的膜區(qū)域如脂質(zhì)筏等進(jìn)行染色。這些富含膽固醇的結(jié)構(gòu)域可以通過使用NBD-6 膽固醇或NBP-12 膽固醇等（Avanti極性脂質(zhì)）來進(jìn)行可視化觀察。

還可以借助于對(duì)細(xì)胞中不同位置有偏好的蛋白質(zhì)來染色感興趣區(qū)域。這種方法的一個(gè)例子是小麥胚芽凝集素(WGA)的使用，它與存在于質(zhì)膜中的唾液酸和N-乙酰氨基葡萄糖基特異結(jié)合。

功能實(shí)驗(yàn)
“功能實(shí)驗(yàn)"是一個(gè)統(tǒng)稱，指的是評(píng)估各種功能的標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)，這些功能可以用熒光標(biāo)志物進(jìn)行可視化觀察。這些標(biāo)志物包括但不限于上述任何標(biāo)記技術(shù)和熒光團(tuán)。對(duì)于其中的許多功能實(shí)驗(yàn)而言，染色試劑盒可在市場(chǎng)上買到，并且可以輕松用于各種樣本。功能實(shí)驗(yàn)的一個(gè)例子是大家都知道且廣泛使用的活細(xì)胞/死細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。兩個(gè)熒光團(tuán)分別用于標(biāo)記活細(xì)胞和死細(xì)胞。在同時(shí)掌握這兩個(gè)值的情況下，就可以評(píng)估細(xì)胞的總體健康狀況。將此信息與其他標(biāo)志物關(guān)聯(lián)起來還可以加深對(duì)底層過程的理解。

熒光染料及其激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)峰值
以上提到的全部染料都在下表中列出。此外，表中還提到了其他熒光染料及其激發(fā)和發(fā)射的波長(zhǎng)峰值。

圖 6： Alexa 488（綠色曲線）和 Alexa 555（黃色曲線）的熒光發(fā)射曲線。兩個(gè)發(fā)射光譜的重疊顯而易見。紅線表示 488 發(fā)射光濾光鏡的帶通。
表1

熒光染料樣本示例	激發(fā)	發(fā)射
Indo-1, Ca saturated	331 nm	404 nm
Indo-1 Ca2+	346 nm	404 nm
Cascade Blue BSA pH 7.0	401 nm	419 nm
Cascade Blue	398 nm	420 nm
LysoTracker Blue	373 nm	421 nm
Alexa 405	401 nm	421 nm
LysoSensor Blue pH 5.0	374 nm	424 nm
LysoSensor Blue	374 nm	424 nm
DyLight 405	399 nm	434 nm
DyLight 350	332 nm	435 nm
BFP（藍(lán)色熒光蛋白）	380 nm	439 nm
Alexa 350	343 nm	441 nm
7-氨基-4-甲基豆素pH 7.0	346 nm	442 nm
氨基豆素	345 nm	442 nm
AMCA共軛物	347 nm	444 nm
豆素	360 nm	447 nm
7-羥基-4-甲基豆素	360 nm	447 nm
7-羥基-4-甲基豆素pH 9.0	361 nm	448 nm
6.8-二氟-7-羥基-4-甲基豆素pH 9.0	358 nm	450 nm
Hoechst 33342	352 nm	455 nm
Pacific Blue	404 nm	455 nm
Hoechst 33258	352 nm	455 nm
Hoechst 33258-DNA	352 nm	455 nm
Pacific Blue抗體共軛物pH 8.0	404 nm	455 nm
PO-PRO-1	434 nm	457 nm
PO-PRO-1-DNA	435 nm	457 nm
POPO-1	433 nm	457 nm
POPO-1-DNA	433 nm	458 nm
DAPI-DNA	359 nm	461 nm
DAPI	358 nm	463 nm
Marina Blue	362 nm	464 nm
SYTOX Blue-DNA	445 nm	470 nm
CFP（青色熒光蛋白）	434 nm	474 nm
eCFP（增強(qiáng)型青色熒光蛋白）	437 nm	476 nm
1-苯胺鄰苯二甲酸-8-磺酸（1,8-ANS）	375 nm	479 nm
Indo-1, Ca free	346 nm	479 nm
1,8-ANS（1-苯胺鄰苯二甲酸-8-磺酸）	375 nm	480 nm
BO-PRO-1-DNA	462 nm	482 nm
BOPRO-1	462 nm	482 nm
BOBO-1-DNA	461 nm	484 nm
SYTO 45-DNA	451 nm	486 nm
evoglow-Pp1	448 nm	495 nm
evoglow-Bs1	448 nm	496 nm
evoglow-Bs2	448 nm	496 nm
Auramine O	431 nm	501 nm
DiO	487 nm	501 nm
LysoSensor Green pH 5.0	447 nm	502 nm
Cy 2	489 nm	503 nm
LysoSensor Green	447 nm	504 nm
Fura-2, high Ca	336 nm	504 nm
Fura-2 Ca2+sup>	336 nm	505 nm
SYTO 13-DNA	488 nm	506 nm
YO-PRO-1-DNA	491 nm	507 nm
YOYO-1-DNA	491 nm	509 nm
eGFP（增強(qiáng)型青色熒光蛋白）	488 nm	509 nm
LysoTracker Green	503 nm	509 nm
GFP (S65T)	489 nm	509 nm
BODIPY FL, MeOH	502 nm	511 nm
Sapphire	396 nm	511 nm
BODIPY FL共軛物	503 nm	512 nm
MitoTracker Green	490 nm	512 nm
MitoTracker Green FM, MeOH	490 nm	512 nm
熒光素0.1 M NaOH	493 nm	513 nm
鈣黃綠素pH 9.0	494 nm	514 nm
熒光素pH 9.0	490 nm	514 nm
鈣黃綠素	493 nm	514 nm
Fura-2, no Ca	367 nm	515 nm
Fluo-4	494 nm	516 nm
FDA	495 nm	517 nm
DTAF	495 nm	517 nm
熒光素	495 nm	517 nm
熒光素抗體共軛物 pH 8.0	493 nm	517 nm
CFDA	495 nm	517 nm
FITC	495 nm	517 nm
Alexa Fluor 488肼類-水	493 nm	518 nm
DyLight 488	493 nm	518 nm
5-FAM pH 9.0	492 nm	518 nm
FITC抗體共軛物pH 8.0	495 nm	519 nm
Alexa 488	493 nm	520 nm
羅丹明110	497 nm	520 nm
羅丹明110 pH 7.0	497 nm	520 nm
吖啶橙	431 nm	520 nm
Alexa Fluor 488抗體共軛物 pH 8.0	499 nm	520 nm
BCECF pH 5.5	485 nm	521 nm
PicoGreendsDNA量化試劑	502 nm	522 nm
SYBR Green I	498 nm	522 nm
羅丹明Green pH 7.0	497 nm	523 nm
CyQUANT GR-DNA	502 nm	523 nm
NeuroTrace 500/525，綠色熒光 Nissl染色-RNA	497 nm	524 nm
DansylCadaverine	335 nm	524 nm
Rhodol Green抗體共軛物 pH 8.0	499 nm	524 nm
Fluoro-Emerald	495 nm	524 nm
Nissl	497 nm	524 nm
熒光素葡聚糖pH 8.0	501 nm	524 nm
羅丹明綠色	497 nm	524 nm
5-（和-6）-羧基-2'，7'-二氯熒光素pH 9.0	504 nm	525 nm
DansylCadaverine, MeOH	335 nm	526 nm
eYFP （增強(qiáng)型黃色熒光蛋白）	514 nm	526 nm
Oregon Green 488	498 nm	526 nm
Oregon Green 488抗體共軛物 pH 8.0	498 nm	526 nm
Fluo-3	506 nm	527 nm
BCECF pH 9.0	501 nm	527 nm
SBFI-Na+	336 nm	527 nm
Fluo-3 Ca2+	506 nm	527 nm
羅丹明123, MeOH	507 nm	529 nm
FlAsH	509 nm	529 nm
鈣綠-1 Ca2+	506 nm	529 nm
鎂綠	507 nm	530 nm
DM-NERF pH 4.0	493 nm	530 nm
鈣綠	506 nm	530 nm
檸檬黃	515 nm	530 nm
LysoSensor Yellow pH 9.0	335 nm	530 nm
TO-PRO-1-DNA	515 nm	531 nm
鎂綠Mg2+	507 nm	531 nm
鈉綠Na+	507 nm	531 nm
TOTO-1-DNA	514 nm	531 nm
Oregon Green 514	512 nm	532 nm
Oregon Green 514抗體共軛物 pH 8.0	513 nm	533 nm
NBD-X	466 nm	534 nm
DM-NERF pH 7.0	509 nm	537 nm
NBD-X, MeOH	467 nm	538 nm
CI-NERF pH 6.0	513 nm	538 nm
Alexa 430	431 nm	540 nm
Alexa Fluor 430抗體共軛物 pH 7.2	431 nm	540 nm
CI-NERF pH 2.5	504 nm	541 nm
Lucifer Yellow, CH	428 nm	542 nm
LysoSensor Yellow pH 3.0	389 nm	542 nm
6-TET, SE pH 9.0	521 nm	542 nm
Eosin抗體共軛物 pH 8.0	525 nm	546 nm
Eosin	524 nm	546 nm
6-Carboxy羅丹明6G pH 7.0	526 nm	547 nm
6-Carboxy羅丹明6G, hydrochloride	525 nm	547 nm
Bodipy R6G SE	528 nm	547 nm
BODIPY R6G, MeOH	528 nm	547 nm
6 JOE	520 nm	548 nm
Cascade Yellow抗體共軛物 pH 8.0	399 nm	549 nm
Cascade Yellow	399 nm	549 nm
mBanana	540 nm	553 nm
Alexa Fluor 532抗體共軛物 pH 7.2	528 nm	553 nm
Alexa 532	528 nm	553 nm
Erythrosin-5-isothiocyanate pH 9.0	533 nm	554 nm
6-HEX, SE pH 9.0	534 nm	559 nm
mOrange	548 nm	562 nm
mHoneydew	478 nm	562 nm
Cy 3	549 nm	562 nm
羅丹明B	543 nm	565 nm
DiI	551 nm	565 nm
5-TAMRA-MeOH	543 nm	567 nm
Alexa 555	553 nm	568 nm
Alexa Fluor 555抗體共軛物 pH 7.2	553 nm	568 nm
DyLight 549	555 nm	569 nm
BODIPY TMR-X, SE	544 nm	570 nm
BODIPY TMR-X, MeOH	544 nm	570 nm
PO-PRO-3-DNA	539 nm	571 nm
PO-PRO-3	539 nm	571 nm
羅丹明	551 nm	573 nm
Bodipy TMR-X conjugate	544 nm	573 nm
POPO-3	533 nm	573 nm
Alexa 546	562 nm	573 nm
BODIPY TMR-X抗體共軛物 pH 7.2	544 nm	573 nm
Calcium Orange Ca2+	549 nm	573 nm
TRITC	550 nm	573 nm
Calcium Orange	549 nm	574 nm
羅丹明鬼筆環(huán)肽 pH 7.0	558 nm	575 nm
MitoTracker Orange	551 nm	575 nm
MitoTracker Orange, MeOH	551 nm	575 nm
藻紅蛋白	565 nm	575 nm
鎂橙	550 nm	575 nm
R-藻紅蛋白pH 7.5	565 nm	576 nm
5-TAMRA pH 7.0	553 nm	576 nm
5-TAMRA	549 nm	577 nm
Rhod-2	552 nm	577 nm
FM 1-43	472 nm	578 nm
Rhod-2 Ca2+	553 nm	578 nm
四甲羅丹明抗體共軛物 pH 8.0	552 nm	578 nm
FM 1-43 lipid	473 nm	579 nm
LOLO-1-DNA	568 nm	580 nm
dTomato	554 nm	581 nm
DsRed	563 nm	581 nm
Dapoxyl (2-aminoethyl) sulfonamide	372 nm	582 nm
四甲羅丹明dextran pH 7.0	555 nm	582 nm
Fluor-Ruby	554 nm	582 nm
Resorufin	571 nm	584 nm
Resorufin pH 9.0	571 nm	584 nm
mTangerine	568 nm	585 nm
LysoTracker Red	578 nm	589 nm
Lissamine羅丹明	572 nm	590 nm
Cy 3.5	578 nm	591 nm
羅丹明Red-X抗體共軛物 pH 8.0	573 nm	591 nm
Sulfo羅丹明101, EtOH	578 nm	593 nm
JC-1 pH 8.2	593 nm	595 nm
JC-1	592 nm	595 nm
mStrawberry	575 nm	596 nm
MitoTracker Red	578 nm	599 nm
MitoTracker Red, MeOH	578 nm	599 nm
X-Rhod-1 Ca2+	580 nm	602 nm
Alexa Fluor 568抗體共軛物 pH 7.2	579 nm	603 nm
Alexa 568	576 nm	603 nm
5-ROX pH 7.0	578 nm	604 nm
5-ROX（5-羥基-X-羅丹明，三乙基銨鹽）	578 nm	604 nm
BO-PRO-3-DNA	574 nm	604 nm
BOPRO-3	574 nm	604 nm
BOBO-3-DNA	570 nm	605 nm
溴化乙錠	524 nm	605 nm
ReAsH	597 nm	608 nm
鈣深紅	589 nm	608 nm
鈣深紅Ca2+	590 nm	608 nm
mRFP	585 nm	608 nm
mCherry	587 nm	610 nm
Texas Red-X抗體共軛物 pH 7.2	596 nm	613 nm
HcRed	590 nm	614 nm
DyLight 594	592 nm	616 nm
乙二胺同二聚體-1-DNA	528 nm	617 nm
乙二胺同二聚體	528 nm	617 nm
碘化丙啶	538 nm	617 nm
SYPRO Ruby	467 nm	618 nm
碘化丙啶-DNA	538 nm	619 nm
Alexa 594	590 nm	619 nm
BODIPY TR-X, SE	588 nm	621 nm
BODIPY TR-X, MeOH	588 nm	621 nm
BODIPY TR-X 鬼筆環(huán)肽pH 7.0	590 nm	621 nm
YO-PRO-3-DNA	613 nm	629 nm
Di-8 ANEPPS	469 nm	630 nm
Di-8-ANEPPS-lipid	469 nm	631 nm
YOYO-3-DNA	612 nm	631 nm
Nile Red-lipid	553 nm	636 nm
Nile Red	559 nm	637 nm
DyLight 633	624 nm	646 nm
mPlum	587 nm	649 nm
TO-PRO-3-DNA	642 nm	657 nm
DDAO pH 9.0	648 nm	657 nm
Fura Red, high Ca	434 nm	659 nm
別藻藍(lán)蛋白pH 7.5	651 nm	660 nm
APC (allophycocyanin)	650 nm	660 nm
Nile Blue, EtOH	631 nm	660 nm
TOTO-3-DNA	642 nm	661 nm
Cy 5	646 nm	664 nm
BODIPY 650/665-X, MeOH	646 nm	664 nm
Alexa Fluor 647 R-藻菊酯鏈霉親和素pH 7.2	569 nm	666 nm
DyLight 649	652 nm	668 nm
Alexa Fluor 647抗體共軛物 pH 7.2	653 nm	668 nm
Alexa 647	653 nm	669 nm
Fura Red Ca2+	435 nm	670 nm
Atto 647	644 nm	670 nm
Fura Red, low Ca	472 nm	673 nm
羧萘熒光素pH 10.0	600 nm	674 nm
Alexa 660	664 nm	691 nm
Alexa Fluor 660抗體共軛物 pH 7.2	663 nm	691 nm
Cy 5.5	673 nm	692 nm
Alexa Fluor 680抗體共軛物 pH 7.2	679 nm	702 nm
Alexa 680	679 nm	703 nm
DyLight 680	678 nm	706 nm
Alexa Fluor 700抗體共軛物 pH 7.2	696 nm	719 nm
Alexa 700	696 nm	720 nm
FM 4-64, 2% CHAPS	506 nm	751 nm
FM 4-64	508 nm	751 nm

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